凝膠滲透色譜柱在蛋白質(zhì)分析中的重要應用說明
更新時間：2025-01-14 點擊次數(shù)：217
一、蛋白質(zhì)分離與純化 凝膠滲透色譜柱是蛋白質(zhì)分離和純化的有力工具。在復雜蛋白質(zhì)混合物中，蛋白質(zhì)分子大小各異。凝膠柱中的凝膠顆粒具有特定的孔徑，大分子蛋白質(zhì)由于分子量大、體積大，只能被排阻在凝膠顆粒之外，在顆粒間的空隙間隨流動相快速流動；而小分子蛋白質(zhì)則能夠擴散進入凝膠顆粒內(nèi)部，在顆粒內(nèi)的孔隙中穿行，從而與流動相產(chǎn)生不同的相對運動速度。這就使得不同大小的蛋白質(zhì)在經(jīng)過時被逐步分離。這種基于分子大小的分離方式無需復雜的化學反應或特殊的相互作用條件，操作相對簡便。
二、蛋白質(zhì)分子量測定
可用于測定蛋白質(zhì)的分子量。根據(jù)分子量大小與在柱上的洗脫順序之間的關(guān)系，可以建立一個標準曲線。將已知分子量的標準蛋白質(zhì)在相同的凝膠滲透色譜條件下進行分析，記錄它們的洗脫體積；然后將待測蛋白質(zhì)進行同樣的分析，通過對比其洗脫體積與標準曲線，就能夠估算出待測蛋白質(zhì)的分子量。
三、蛋白質(zhì)純度評估
在蛋白質(zhì)純化過程中，可以清晰地展現(xiàn)出蛋白質(zhì)樣品中的雜質(zhì)情況。如果樣品中存在少量與其他主蛋白分子量相近的雜質(zhì)蛋白，雖然凝膠滲透色譜柱可能無法將它們與主蛋白分離，但仍然可以通過觀察洗脫峰的形狀、是否有拖尾或者額外的小峰等情況，來初步判斷蛋白質(zhì)樣品的純度。
四、蛋白質(zhì)低聚性分析
還可用于分析蛋白質(zhì)的低聚性。如果蛋白質(zhì)以低聚體形式存在，不同低聚體的分子量存在差異，在通過時，會按照分子量大小依次被洗脫出來，從而可以確定蛋白質(zhì)的低聚體組成情況。
五、蛋白質(zhì)與其他化合物相互作用研究
在研究蛋白質(zhì)與其他小分子或大分子的相互作用時，將它們的共混溶液通過凝膠滲透色譜柱。若存在相互作用，會使蛋白質(zhì)的保留時間發(fā)生改變，通過分析這種改變情況，可以評估它們之間的相互作用強度、親和性和配合比例等信息。
