陰離子色譜柱洗脫：

1、洗脫液的選擇：

（1）保證所有組分在洗脫液梯度范圍內都是穩(wěn)定的。

（2）要使結合在離子交換劑上的所有組分在洗脫液梯度范圍內都能夠被洗脫。

（3）梯度范圍盡量小一些，以提高分辨率。

 

2、洗脫方式：離子交換色譜一般采用梯度洗脫，通常有改變離子強度和改變pH值兩種洗脫方式。

（1）改變離子強度的洗脫：在洗脫過程中逐步增大離子強度，從而使與離子交換劑結合的各個組分被洗脫下來。

（2）改變pH值的洗脫：陽離子交換劑一般是pH值從低到高洗脫，陰離子交換劑一般是pH值從高到低洗脫。由于pH值可能對蛋白的穩(wěn)定性有較大的影響，一般采用改變離子強度進行洗脫。

 

3、洗脫速度：洗脫液的流速會影響離子交換分離效果，洗脫速度通常要保持恒定。一般來說，洗脫速度慢比快的分辨率要好，但過慢會造成分離時間長、樣品擴散、譜峰變寬和分辨率降低等。

如果洗脫峰相對集中于某個區(qū)域造成重疊，應適當縮小梯度范圍或降低洗脫速度來提高分辨率。如果分辨率較好，但洗脫峰過寬，可適當提高洗脫速度。

 

陰離子色譜柱保留特性的變化規(guī)律及應對措施

在離子交換色譜中,存在著3種電離平衡,分別是樣品組分的電離平衡、流動相中緩沖溶液的電離平衡、柱上離子交換基團的電離平衡。

陰離子色譜柱保留行為的變化、流動相組成的調整,會綜合影響到上述的電離平衡,這種影響較為復雜,并不是一致的。如提高流動相的pH值,會促進流動相的電離,增加流動相的洗脫強度,減小樣品組分的保留;pH值的增加同時又會促進樣品的電離,增加樣品組分的保留,同時還會抑制陰離子色譜柱上硅烷銨鹽的電離,減小樣品組分的保留。